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科研干貨：細胞核內參抗體-增殖細胞核抗原（PCNA）單抗
來源：戴安生物
發布時間：2023-12-28
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PCNA
? ? ? 增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）于1978年在系統性紅斑狼瘡（Systemic Lupus Erythematosus, SLE）患者血清中首次發現并命名，其只存在于正常增殖細胞及腫瘤細胞內而得名。PCNA是一種分子量為36kDa的蛋白質，在細胞核內合成并存在，作為DNA聚合酶的輔助蛋白，在細胞增殖的啟動上起重要作用，是反應細胞增殖狀態的良好指標。由于PCNA在細胞核內穩定表達，因此其抗體被廣泛應用于細胞核蛋白的內參抗體。
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1.? PCNA的結構
? ? ? ?滑動夾PCNA能夠以一定的秩序與多種蛋白及多種DNA聚合酶等結合，實現對DNA?的復制、損傷修復、細胞周期調控及凋亡等事件的協同。
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2.? PCNA的功能
? ? ? ?在DNA復制中，DNA兩條鏈的合成依賴不同機制。前導鏈的合成是連續的并依賴于DNA聚合酶5'→3'聚合酶活性。后隨鏈的合成是不連續的，每個岡崎片段稍小于復制叉結構上解旋的可伸縮部分。
???????DNA合成中起始RNA引物由引物酶合成，緊接著由DNA聚合酶α( Polα) 合成一小段DNA。兩種酶的活性同屬于一種引物酶-polα蛋白復合體。復制因子C (RFC) 發揮依賴于DNA的ATP酶的活性，結合到引物-模板結合處并催化環狀復制因子PCNA裝載環繞到DNA上。PCNA結合到引物的3'末端，防止Polα再次結合，發出與高效復制能力的聚合酶結合的信號。該過程使PCNA與具有高效復制能力的聚合酶—Polδ或Polε結合。
???????在后隨鏈合成中，當聚合酶Polδ到后一個岡崎片段5'端時，便進行鏈置換合成。由Polδ合成的新的片段便會部分取代后一個岡崎片段，被取代的單鏈形成翹起的片狀結構(單鏈起始RNA引物) 。該結構與ssDNA結合蛋白RNA結合，并且引發Polδ從PCNA上解離。PCNA招募片狀結構特異性核酸內切酶-1( FEN-1)，片裝結構被切除，形成成熟的岡崎片段。
???????總之，在DNA 復制過程中，Polδ，Polε，FEN-1， ligaseI，拓撲異構酶?I?和Ⅱ等蛋白因子在時間和空間上發揮功能是通過PCNA協調實現的，PCNA 是DNA的復制和修復的樞紐。
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3.??如何選擇合適的內參抗體？
? ? ? ?常用的細胞總蛋白內參有GAPDH和β-Actin或β-Tubulin等。當實驗樣品中只是核蛋白，而不是細胞總蛋白提取液時，可以用組蛋白H（Histone H），或者增殖細胞核抗原（PCNA）等為核內參抗體。除了這些，其它常見核蛋白內參還有K70, K80, Lamin A和B，在一些研究中，Erk2、TATA binding protein（TBP）以及c-Jun、c-Fos等也有使用。
? ? ? ?需要注意的是核蛋白內參的選擇需要考慮實際應用場景，比如在細胞增殖相關試驗中，c-Jun由于自身表達變化就不適合做內參；而在凋亡實驗時，TBP、Lamin等也不適合作內參。
? ? ? ?另外，還需根據目的蛋白大小選擇合適核內參，推薦選擇的內參與待測目的蛋白分子量最好相差5kDa以上。PCNA的檢測分子量約28kDa，而Histone H3的檢測分子量約18kDa，因此PCNA更適合用于檢測較大分子量目標蛋白，而Histone H3則不適合用于13~23 kDa的目的蛋白內參。另外，雖然PCNA是最合適的核內參抗體之一，但在某些條件下，一些影響增殖的因素會導致樣品間PCNA含量變化，這種情況下PCNA就不適合作內參。
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? ? ? ?戴安生物最新開發出來的PCNA單克隆抗體，精選人PCNA蛋白序列設計抗原，可用于人、小鼠、大鼠樣本的WB檢測內參。另外，抗體效價也非常高，在WB實驗中推薦稀釋比為1:2,000~1:5,000。另外，該PCNA內參抗體在人組織（卵巢癌）的免疫組織化學（IHC）檢測中也有比較良好效果，是一款非常適合免疫組化實驗中對細胞骨架進行染色定位的抗體產品。該產品實驗驗證效果展示如下：
PCNA抗體WB驗證（克隆號：9C6）
PCNA抗體IHC驗證（克隆號：8B6）
PCNA抗體IHC驗證（克隆號：9C6）
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